摘要：对上海飞测生物科技有限公司研发生产的*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条在粮食谷物饲料中的检测性能进行了评估。该产品的最低检出限（LOD）为0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg，线性范围为1.00-50.00μg/kg，线性范围内的添加回收率为92.89%~.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。与其他真菌*素的交叉反应率均小于5%。该产品具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点，适合用于对粮食谷物饲料中*曲霉*素B1的进行快速定量测定。
关键词：*曲霉*素B1检测试纸条；荧光定量免疫层析；*曲霉*素B1；粮食谷物饲料
曲霉*素B1（AflatoxinB1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），具有强致癌性以及剧*性，是迄今发现的各种真菌*素中最稳定的一种。从年开始*曲霉*素被认定为世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定的一类致癌物，是世界公认的三大强致癌物质之一，而*曲霉*素B1由于*性最大，污染最重，是危害最大的一种*曲霉*素。
*曲霉*素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。目前，GB-《食品安全国家标准食品中真菌*素限量》中对粮食谷物及其制品中*曲霉*素B1的最高限量为20μg/kg。GB-《饲料卫生标准》中对不同种类的饲料中*曲霉*素B1的最高限量标准从10-50μg/kg。
目前，国标法测定*曲霉*素B1采用HPLC法，需要大型的仪器设备，价格昂贵，操作过程复杂、时间较长，且无法在现场和基础小型实验室使用。除此之外，也有采用*曲霉*素酶联免疫试剂盒或胶体金快速检测试纸条用于大量样品的筛查，操作简便，检测快速，成本也较低，但准确性和重复性较差，容易造成假阳性或者假阴性。因此，急需一种既简便快速，又能准确定量的检测方法，荧光定量免疫层析正好可以满足这种需求。本文通过对多种粮食谷物饲料样品的实测，验证了上海飞测生物开发的*曲霉*素B1荧光定量快速检测试纸条的技术性能。
1实验材料和方法
1.1试剂和材料
除注明外，均为分析纯，试验用水均为UP水。
*曲霉*素B1荧光荧光定量检测试纸条（由包被有荧光微球标记*曲霉*素B1抗体的乳胶垫、喷涂有*曲霉*素B1抗原的检测线和喷涂有羊抗鸡二抗的控制线的NC膜、样品垫及吸收垫组成）、样品提取液、样品稀释液、标准曲线ID卡及标准曲线条形码均由上海飞测生物科技有限公司提供。
*曲霉*素B1及其他真菌*素的标准品：购自Sigma公司；大米、玉米、小麦、面粉等样品从超市购得或从企业取样。麸皮，小麦、面粉等饲料样品从饲料厂和企业取样。
1.2仪器与设备
FD-型荧光免疫定量分析仪和FD-型试纸条恒温孵育器，上海飞测生物科技有限公司提供；低速离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司；漩涡振荡器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；电子天平：Sartorius；
1.3试验方法
1.3.1样品的前处理
取具有代表性的待测样品g，用小型粉碎机粉碎1min后过20目筛，收集过筛的细小样品。称取1.0±0.02g过筛的样品于10mL离心管中，加入5mL提取液，用漩涡混匀仪震荡5min(或者摇床振荡10min）后，RPM离心1min，取上清。
1.3.2检测过程
取50μL离心上清液加入μL样品稀释液中，用漩涡混匀器混匀3-5s，然后取μL加入到*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条的加样孔中，置于37℃恒温孵育器中温育10min后，将试纸条插入荧光免疫定量分析仪中读数，即为样品的实际检测浓度。当检测值大于50μg/kg时，可用提取液将离心上清液稀释5倍后再进行检测，所得读数值乘以对应的稀释倍数即为最终的检验结果。
2检测结果分析
2.1线性范围与检出
在样品提取液中，分别添加1.00μg/kg、2.50μg/kg、5.00μg/kg、10.00μg/kg、25.00μg/kg、50.00μg/kg的*曲霉*素B1标准品，用上海飞测生物*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条每个样品检测3次，以添加浓度为为纵坐标，以荧光定量检测试纸条的检测结果为横坐标，拟合曲线并计算线性相关系数，结果如下：
图1*曲霉*素B1标准品添加与荧光定量试纸条检测值的线性关系
计算得出小麦的线性范围：1.00～50.00μg/kg（6点），回归方程:y=1.x+0.,相关系数R=0.；（见图1）。取10个无污染（阴性）小麦样品、10个无污染（阴性）玉米样品和10个无污染（阴性）大米样品，用上海飞测生物*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条每个样品检测3次，检测限（LOD）为测定平均值加3倍标准偏差，定量限(LOQ)为测定平均值加10倍标准偏差。测试结果表明，*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条的LOD为0.29μg/kg，LOQ为0.91μg/kg。
2.2准确性和重复性分析
在用国标法测定为的不同种类空白样品中分别添加*曲霉*素B1浓度为1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00μg/kg的标准品，然后按照*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条的检测方法进行检测。
检测结果见表1。
表1不同样本检测的准确性和重复性
从表1可以看出，上海飞测生物科技有限公司所生产的*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条测试不同粮食谷物中*曲霉*素B1的添加回收率在92.89%~.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。
2.3与色谱方法的对比试验结果
取大米、小麦、玉米、高粱、花生、麸皮、喷浆玉米、DDGS、豆粕受污染样品各1份，先采用国标液相色谱法进行测定，再使用上海飞测生物科技有限公司所生产的*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条进行测定，各测试3个平行样。检测结果如下：
表2*曲霉*素B1荧光定量检测卡与高效液相色谱法检测值对比
表2表明，在不同的粮食谷物饲料中，上海飞测生物科技有限公司所生产的*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条与液相色谱法的符合率为89.89%~.65%，3次重复测定的的CV值在10.29%以内。2.4方法特异性
选择其他5种常见的真菌*素的标准品在阴性玉米中进行添加，添加的浓度为μg/kg，然后用飞测生物*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条进行测试，每个样品测3次取平均值；结果显示与赭曲霉*素A，伏马菌素B1，呕吐*素、T-2*素、玉米赤霉烯酮交叉反应率均＜5%。实验结果表明，*曲霉*素B1胶体金试剂条对伏马*素、赭曲霉*素、*曲霉*素、玉米赤霉*素几乎无交叉反应，其方法特异性可以能满足检测要求。
表3交叉反应率表
3结论
本实验采用上海飞测生物科技有限公司所生产的*曲霉*素B1荧光定量检测试纸条对不同的粮食谷物饲料样本进行测试，该产品的最低检出限（LOD）为0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg，线性范围为1.00-50.00μg/kg，线性范围内的添加回收率为92.89%~.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。与其他真菌*素的交叉反应率均小于5%。其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对*曲霉*素B1的分析标准的技术要求。该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点，可用于不同粮食谷物饲料中*曲霉*素B1的快速定量检测分析。
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